本质初始前，抗东说念主软骨糖卵白 39 抗体早已在微孔酶标板上设下 “罗网”。当加入 HCgp-39 校准品和待测样本时，HCgp-39 就像 “小主意”，自动与抗体谄谀。接着，HRP 象征的抗东说念主软骨糖卵白 39 抗体也加入其中，造成得当的 “夹心复合物”。经过温育和洗涤，去除未谄谀的因素后，加入底物 A 和 B，在 HRP 的催化下，底物从无色变为蓝色，再加入隔断液（2M 硫酸），一会儿变成黄色。黄色越深，标明样本中的 HCgp-39 越多。临了，通过酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），就能缱绻出样本中 HCgp-39 的浓度。

本质前，要提前 2 小时将试剂盒和样本从雪柜取出，使其在室温下充分复温。从雪柜取出的浓缩洗涤液若有结晶，放在温水浴中加热使其熔解，再按 1:20 的比例用蒸馏水稀释。底物液 A 和 B 需在使用前按 1:1 的体积羼杂，且在 15 分钟内使用。

本质还需要酶标仪（450nm）、精密移液器及一次性吸头、蒸馏水、洗瓶或自动洗板机、37℃水浴锅或恒温箱、500ml 量筒等物品。

样本蚁合后，细胞培养上清、血清、血浆齐要在 4000rpm 条目下离心 20 分钟，上清液保存在 - 20℃以下，幸免反复冻融。组织匀浆需用预冷 PBS 冲洗组织、剪碎后按 1:9 比例与 PBS 羼杂研磨，可超声幻灭或反复冻融，5000×g 离心 5-10 分钟取上清。细胞索求液的得到，贴壁细胞经 PBS 清洗、胰卵白酶消化后离心汇集，悬浮细胞胜仗离心汇集，细胞用 PBS 洗涤 3 次，重悬后反复冻融，1500×g 离心 10 分钟取上清。其他生物体液则在 1000×g 离心 20 分钟后取上清检测。

操作时，先配制好责任液，从铝箔袋中取出所需板条，剩余的密封放回雪柜。斥地好步调品孔、0 值孔、空缺孔和样本孔，加入相应液体后，加入 HRP 象征的检测抗体，用封板膜盖住响应板，在 37℃避光孵育 60 分钟。之后进行洗板，若用自动洗板机，铭刻添加 30 秒浸泡武艺。将底物羼杂后加入各孔，再次避光孵育 15 分钟，临了加入隔断液，在酶标仪 450nm 波长上读取 OD 值。

以步调品浓度为横坐标，对应的吸光度为纵坐标，用缱绻机软件拟合创建步调弧线方程，通过样本吸光度缱绻浓度值，若样本稀释过，需乘以稀释倍数。

使用试剂盒时，要在有用期内使用，不与其他厂家试剂盒或组分混用，用配套样品稀释液。操作历程中，幸免卵白溶液起泡，加样换枪头开云(中国)kaiyun网页版登录入口开云体育，保证温育时刻和洗涤充分，注重底物和隔断液的使用要求，剩余板条密封低温干燥保存。同期，要注新生物安全，贯注交叉沾污，幸免试剂构兵皮肤和吸入烟雾，本质时戴手套，甩掉后洗手。